研究背景

人用和獸用藥物是一種新興的有機污染物，首次發(fā)現(xiàn)是在20世紀70年代的時候，在污水流出物中檢測出。藥物的生產(chǎn)和發(fā)展旨在治愈疾病、改善人類健康，但由于過量或過期藥物的隨意排放，同時廢水處理廠（WWTPs）對大多數(shù)藥物殘留的去除較為低效，所以低濃度藥物及其分解產(chǎn)物仍然廣泛分布在水生系統(tǒng)中。

抗抑郁藥是全球治療焦慮、恐慌癥和抑郁癥最常用的藥物。它們也是水生環(huán)境中最常檢測到的藥物。已有研究表明，多種抗抑郁藥物在水生環(huán)境及水生生物中積累，抗抑郁藥物可能會影響水生生物的繁殖能力、生存、生長、捕食和學習行為，但是抗抑郁藥物影響水生生物的作用機制仍然難以明確。

作者為了更好地了解不同種類抗抑郁藥誘導的毒性反應在非靶向魚類中的作用機制，用分屬于不同抗抑郁藥物類別的阿米替林（Amitriptyline hydrochloride）、氟西?。‵luoxetine hydrochloride）和鹽酸米安色林（mianserin hydrochloride）對早期發(fā)育階段的斑馬魚胚胎進行處理，然后進行了轉錄組測序（RNA-Seq），基于前面轉錄組的分析結果，作者采取兩組qPCR驗證實驗：

1.?DEG表達模式驗證

作者根據(jù)RNA- seq結果選取了15個基因（4個上調(diào)、11個下調(diào)），用qPCR驗證其表達模式。結果表明，qPCR結果與RNA-Seq結果相似（圖3A~C）。此外，通過線性擬合和皮爾遜相關性方法分析了RNA-Seq和qPCR的結果間的相關性，結果表明兩種方法的分析結果呈顯著正相關（圖3D~F）。

2.不同濃度的抗抑郁藥物處理下DEG的應答反應

作者用三種不同濃度的抗抑郁藥（0.1、1和10 μg /L）處理斑馬魚胚胎，應用qPCR試驗確定6個選定的基因的濃度—應答關系。結果表明，ptgdsb的mRNA水平只在1 μg /L阿米替林和10 μg /L米安色林處理組顯著降低；而dusp5表達水平在10 μg /L阿米替林和米安色林處理組以及所有氟西汀處理組中均顯著降低；除了在1和10 μg /L阿米替林處理組中的nr1d1表達水平未受抑制之外，nr1d1和per2在幾乎所有抗抑郁藥物處理組均受到顯著抑制。此外，兩個與早期生長應答相關的基因egr1和egr4在0.1和10 μg /L阿米替林處理組和所有米安色林處理組中表達下調(diào)，egr4在所有氟西汀處理組降低，而egr1只在0.1和10 μg /L氟西汀處理組中表達降低（圖4）。

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